Twous Tisi Sourit PCR Twous

Rapid anplifikasyon jèn sib la dirèkteman nan echantiyon tisi bèt san ekstraksyon.

Twous la Mouse Tissue PCR dirèk adopte yon konsepsyon anbalaj inik ki gen ladan tout reyaktif yo pou preparasyon ADN rapid jenomik ak anplifikasyon PCR. Li aplikab pou pirifikasyon ADN yon sèl etap nan tisi sourit (ke, zòrèy ak zòtèy) ak anplifikasyon PCR ki vin apre a ak deteksyon. Pwosesis la an antye pa gen ladan omojeneizasyon, kraze, dijesyon lannwit lan, ekstraksyon sòlvan òganik, presipitasyon etanòl oswa etap pou pirifye kolòn. Rezilta ki estab ka jwenn ak operasyon ki senp epi vit.

2 × Dir PCR MasterMix yo bay nan twous sa a se yon reyaktif PCR trè konpatib ki ka efikasman ak espesyalman anplifye ADN san yo pa bezwen retire enpurte tankou pwoteyin. Reyaktif sa a gen yon antikò modifye cho-kòmanseTaq ADN polimeraz, dNTPs, MgCl2, tanpon, osi byen ke améliorant, optimizeur ak estabilize pou reyaksyon PCR. Reyaksyon an PCR ka fèt pa senpleman ajoute nan modèl apeprè ekstrè ak primè espesifik. Pwosesis la an antye se vit, senp, sansib, espesifik ak ki estab, ki se espesyalman apwopriye pou tès depistaj segondè-debi. 2 × Dir PCR MasterMix la gen koloran elektwoforèz premix, pou pwodwi PCR yo ka dirèkteman voye pou deteksyon elektwoforèz apre reyaksyon an. 3 'nan fen pwodwi a PCR gen yon A-tailing, ki ka itilize pou klonaj TA.

Chat. Non Anbalaj Size
4992531 20 µl × 50 rxn
4992532 20 µl × 200 rxn

Pwodwi detay

Workflow

Egzanp eksperimantal

FAQ

Pwodwi Tags

Karakteristik

■ Senp epi rapid: ADN jenomik ka rapidman ekstrè nan tisi sourit nan 60 minit san fanm k'ap pile azòt likid ak ekstraksyon sòlvan òganik.
■ Wide aplikasyon: Li apwopriye pou ekstraksyon yon sèl-etap nan ADN jenomik soti nan ke sourit, zòrèy, zòtèy ak lòt tisi.
■ Segondè espesifik: Polimeraz la Taq yo itilize nan pwodui sa a se yon antikò modifye anzim cho-kòmanse, ak modèl segondè ak Jadendanfan afinite ak espesifikasyon anplifikasyon, ki se espesyalman apwopriye pou jenotip ak idantifikasyon transjenik.
■ Deteksyon jèn: pwodwi a fasil pou opere avèk rezilta serye, e li espesyalman apwopriye pou analiz debi ak deteksyon tisi sourit

Tout pwodwi yo ka Customized pou ODM / OEM. Pou plis detay,tanpri klike sou Sèvis Customized (ODM / OEM)


  • Previous:
  • Pwochen:

  • product_certificate04 product_certificate01 product_certificate03 product_certificate02
    ×

    Workflow

    Experimental Example

    Sèvi ak Twous Tisi Sourit PCR Twous ak pwodwi ki enpòtan nan men founisè A pou anplifye 1000 bp, 2000 bp ak 3000 fragman bp soti nan ke sourit, zòrèy sourit ak ke rat respektivman. Rezilta a te montre ke Mouse Tissue Direct PCR Twous gen pi bon espesifik ak pousantaj siksè.

    K: Pa gen bann anplifikasyon

    A-1 Modèl

    ■ Modèl la gen enpurte pwoteyin oswa inhibiteur Taq, elatriye ——Pire modèl ADN, retire enpurte pwoteyin oswa ekstrè ADN modèl avèk twous pirifikasyon.

    ■ Denaturasyon modèl la pa konplè ——Ki apwopriye ogmante tanperati denaturasyon ak prolonje tan denaturasyon.

    ■ Degradasyon Modèl —— Re-prepare modèl la.

    A-2 Jadendanfan

    ■ Kalite pòv nan Jadendanfan -— Re-sentetiz Jadendanfan an.

    ■ Primè degradasyon ——Aliquot prime konsantrasyon segondè yo nan ti volim pou prezèvasyon. Evite konjelasyon miltip ak dekonjle oswa alontèm 4 ° C kriokonsèvasyon.

    ■ Konsepsyon move nan prime (egzanp longè Jadendanfan pa ase, dimè ki te fòme ant Jadendanfan, elatriye) -Reba konsepsyon (evite fòmasyon jadendanfan ak estrikti segondè)

    A-3 Mg2+konsantrasyon

    ■ Mg2+ konsantrasyon twò ba ——Byen ogmante Mg2+ konsantrasyon: Optimize Mg la2+ konsantrasyon pa yon seri de reyaksyon soti nan 1 mM a 3 mM ak yon entèval nan 0.5 mM detèmine Mg nan pi bon2+ konsantrasyon pou chak modèl ak Jadendanfan.

    A-4 tanperati rkwit

    ■ Tanperati a wo rkwit afekte obligatwa nan Jadendanfan ak modèl. ——Diminye tanperati a annealing ak optimize kondisyon an ak yon gradyan nan 2 ° C.

    A-5 ekstansyon tan

    ■ Kout tan ekstansyon —— Ogmante tan ekstansyon.

    K: Fo pozitif

    Fenomèn: echantiyon negatif montre tou bann sekans sib yo.

    A-1 Kontaminasyon nan PCR

    ■ Kwa kontaminasyon nan sekans sib oswa pwodwi anplifikasyon —— Ak anpil atansyon pa pipet echantiyon an ki gen sekans sib nan echantiyon negatif la oswa gaye yo soti nan tib la santrifujeur. Reyaktif yo oswa ekipman yo ta dwe otoklave pou elimine asid nikleyè ki deja egziste yo, epi egzistans kontaminasyon yo ta dwe detèmine nan eksperyans kontwòl negatif.

    ■ Kontaminasyon reyaktif ——Aliquot reyaktif yo epi estoke nan tanperati ki ba.

    A-2 Pwemyer

    ■ Mg2+ konsantrasyon twò ba ——Byen ogmante Mg2+ konsantrasyon: Optimize Mg la2+ konsantrasyon pa yon seri de reyaksyon soti nan 1 mM a 3 mM ak yon entèval nan 0.5 mM detèmine Mg nan pi bon2+ konsantrasyon pou chak modèl ak Jadendanfan.

    ■ Move konsepsyon Jadendanfan, ak sekans sib la gen omoloji ak sekans ki pa sib la. —— Re-konsepsyon primè.

    K: anplifikasyon ki pa espesifik

    Fenomèn: Gwoup yo anplifikasyon PCR yo konsistan avèk gwosè a espere, swa gwo oswa piti, oswa pafwa tou de bann anplifikasyon espesifik ak bann anplifikasyon ki pa espesifik rive.

    A-1 Jadendanfan

    ■ Pòv espesifik Jadendanfan

    —— Re-konsepsyon Jadendanfan.

    ■ Konsantrasyon Jadendanfan an twò wo —— Byen ogmante tanperati denaturasyon an epi prolonje tan denaturasyon an.

    A-2 Mg2+ konsantrasyon

    ■ Mg la2+ konsantrasyon twò wo ——Byen diminye konsantrasyon Mg2 +: Optimize Mg la2+ konsantrasyon pa yon seri de reyaksyon soti nan 1 mM a 3 mM ak yon entèval nan 0.5 mM detèmine Mg nan pi bon2+ konsantrasyon pou chak modèl ak Jadendanfan.

    A-3 polimeraz tèrmabl

    ■ Kantite twòp anzim ——Redwi kantite anzim kòmsadwa nan entèval 0.5 U.

    A-4 tanperati rkwit

    ■ Tanperati rkwit la twò ba ——Apropreman ogmante tanperati rkwit la oswa adopte metòd rkwit de-etap la

    A-5 sik PCR

    ■ Twòp sik PCR —— Diminye kantite sik PCR.

    K: Gwoup Mizik oswa smear

    A-1 Jadendanfan——Pòv espesifik ——Re-konsepsyon Jadendanfan a, chanje pozisyon an ak longè Jadendanfan a amelyore espesifik li yo; oswa fè PCR enbrike.

    A-2 Modèl ADN

    —— Modèl la pa pi ——Pirifye modèl la oswa ekstrè ADN avèk twous pirifikasyon.

    A-3 Mg2+ konsantrasyon

    ——Mg2+ konsantrasyon twò wo ——Byen diminye Mg2+ konsantrasyon: Optimize Mg la2+ konsantrasyon pa yon seri de reyaksyon soti nan 1 mM a 3 mM ak yon entèval nan 0.5 mM detèmine Mg nan pi bon2+ konsantrasyon pou chak modèl ak Jadendanfan.

    A-4 dNTP

    —— Konsantrasyon dNTP yo twò wo —— Diminye konsantrasyon dNTP kòmsadwa

    A-5 tanperati rkwit

    ——Tan ba tanperati rkwit ——Apropreman ogmante tanperati rkwit la

    A-6 sik

    ——Twòp sik ——Optimize nimewo sik la

    K: Konbyen ADN modèl yo ta dwe ajoute nan yon sistèm reyaksyon 50 μl PCR?
    ytry
    K: Ki jan yo anplifye fragman long?

    Premye etap la se yo chwazi polimeraz ki apwopriye a. Regilye polimeraz Taq pa ka koreksyon akòz mank de aktivite exonuclease 3'-5 ', ak dezekilib pral redwi anpil efikasite nan ekstansyon nan fragman. Se poutèt sa, regilye Taq polimeraz pa ka efektivman anplifye fragman sib ki pi gran pase 5 kb. Taq polymérase ak modifikasyon espesyal oswa lòt segondè fidelity polymérase yo ta dwe chwazi amelyore efikasite ekstansyon ak satisfè bezwen yo nan anplifikasyon fragman long. Anplis de sa, anplifikasyon nan fragman long mande tou pou ajisteman korespondan nan konsepsyon Jadendanfan, tan denaturasyon, tan ekstansyon, tanpon pH, elatriye Anjeneral, Jadendanfan ak 18-24 bp ka mennen nan pi bon sede. Yo nan lòd yo anpeche domaj modèl, tan an denaturasyon nan 94 ° C yo ta dwe redwi a 30 sec oswa mwens pou chak sik, ak tan nan monte tanperati a 94 ° C anvan anplifikasyon yo ta dwe mwens pase 1 min. Anplis, mete tanperati a ekstansyon nan apeprè 68 ° C ak desine tan an ekstansyon selon pousantaj la 1 kb / min ka asire anplifikasyon efikas nan fragman long.

    K: Ki jan amelyore fidelite a anplifikasyon nan PCR?

    Pousantaj nan erè nan anplifikasyon PCR ka redwi lè l sèvi avèk divès kalite ADN polymerases ak fidelite segondè. Pami tout polimeraz ADN Taq yo jwenn twò lwen, Pfu anzim gen to erè ki pi ba a ak fidelite ki pi wo a (gade tablo ki tache). Anplis de sa nan seleksyon anzim, chèchè yo ka plis redwi pousantaj mitasyon PCR pa optimize kondisyon reyaksyon, ki gen ladan optimize konpozisyon tanpon, konsantrasyon nan polimeraz tèrmostab ak optimize nimewo sik PCR.

    Ekri mesaj ou isit la epi voye li ban nou