Ultra HiFidelity PCR Twous

Segondè fidelite, segondè espesifik ak segondè efikasite cho-kòmanse PCR premix.

Ultra HiFidelity PCR Twous se yon nouvo wo-fidelite PCR anplifikasyon premix apwopriye pou klonaj PCR ki gen rapò ak deteksyon. Ultra HiFi ADN Polymerase ki genyen nan twous lan se yon nouvo vit ak segondè-fidelite ADN polymérase devlope pa teknoloji evolisyon molekilè dirije. Li amelyore afinite ADN polimeraz la nan modèl, amelyore vitès anplifikasyon ak kapasite ekstansyon anzim lan, epi ogmante pousantaj siksè nan PCR ak sede pwodwi.

Chat. Non Anbalaj Size
4992970 1ml
4992971 5 * 1ml
4992978 5 * 5 * 1ml

 

 


Pwodwi detay

Egzanp eksperimantal

FAQ

Pwodwi Tags

Karakteristik

■ Fasil yo opere: Sa a se twous apwovizyone kòm 2 × premix, ak PCR ka fèt pa senpleman ajoute modèl ak Jadendanfan.
■ Segondè fidelite: fidelite a se 50 fwa sa yo ki an Taq polymérase.
■ Segondè espesifik: Ekselan pèfòmans cho-kòmanse asire espesifik pwodwi ..
■ Rapid anplifikasyon: vitès ekstansyon an ka rive jwenn 10-15 seg / kb.
■ Bonjan ekstansyon: Jiska 20 kb fragman ADN ka anplifye.
■ Wide aplikabilite: Twous la gen PCR Enhancer epi li apwopriye pou anplifikasyon GC segondè ak modèl konplèks.

Espesifikasyon

Kalite: Segondè fidelite ADN Polymerase
Vitès anplifikasyon: 10-15 sec / kb
Fragman gwosè: <20kb
Aplikasyon: segondè fidelite PCR anplifikasyon, jèn klonaj, segondè GC modèl anplifikasyon, jèn klonaj nan genom konplèks, cDNA segondè fidelite anplifikasyon, deteksyon SNP, sit-espesifik mitasyon, elatriye.
Sede ekstraksyon ADN soti nan divès tisi plant:
Remak: sede ADN depann sou kalite echantiyon. Tout materyèl ki anwo yo soti nan fèy sansib.

Tout pwodwi yo ka Customized pou ODM / OEM. Pou plis detay,tanpri klike sou Sèvis Customized (ODM / OEM)


  • Previous:
  • Pwochen:

  • product_certificate04 product_certificate01 product_certificate03 product_certificate02
    ×
    Experimental Example Cho-kòmanse asire pwodwi espesifik
    Figi 1. Ultra HiFi gen ekselan fonksyon cho-kòmanse asire espesifik nan pwodwi anplifikasyon. Yo te aplike metòd alèt molekilè (Ma et al., Anal Biochem, 2006).
    Experimental Example Ekselan fidelite segondè, 50 fwa pi wo pase Taq Polymerase
    Figi 2. Fidelite nan Ultra HiFi se 50 fwa pi wo pase sa yo ki an komen Taq polymérase. Se fidelite polimerizasyon Taq polimeraz (san aktivite korektif) ki itilize kòm referans.
    Experimental Example Rapid anplifikasyon ak fragman long ka anplifye vit
    Fig. 3. Ultra HiFi ka pwolonje jiska 5 sec / kb pou fragman ki pi piti pase 4 kb. Pou fragman long, tan an anplifikasyon ka pwolonje kòmsadwa. Pou fragman plis pase 15 kb, limit la vitès ka jiska 30 sec / kb. M: TIANGEN D15000 Makè
    Experimental Example Experimental Example Experimental Example Inivèsalite fò ak espesifik segondè, fasil pou li GC segondè ak fragman long ki soti nan diferan sous
    Figi 4. Ultra HiFi gen gwo espesifik pou asire pousantaj siksè anplifikasyon ak kantite pwodwi pou diferan kalite modèl.
    A. Ultra HiFi rezilta anplifikasyon
    B. Hi-Fi rezilta anplifikasyon anzim nan Founisè K
    C. Hi-Fi rezilta anplifikasyon anzim nan Founisè N
    M: TIANGEN D15000 Makè
    Lane 1-5. Rezilta anplifikasyon modèl ki gen diferan longè: 1. 750 bp; 2. 1 kb; 3.
    2 kb; 4. 4 kb; 5. 6 kb
    Lane 6. Rezilta anplifikasyon nan modèl GC segondè: 1915 bp (GC%: 70%);
    Lane 7-11. Rezilta anplifikasyon modèl 2 kb nan divès kalite genom: 7. Rat; 8.
    Diri; 9. Ble; 10. Mayi; 11. Bakteri;
    Lane 12-14. 8 kb rezilta fragman anplifikasyon long: 12. Rice; 13. Mayi;
    K: Pa gen bann anplifikasyon

    A-1 Modèl

    ■ Modèl la gen enpurte pwoteyin oswa inhibiteur Taq, elatriye ——Pire modèl ADN, retire enpurte pwoteyin oswa ekstrè ADN modèl avèk twous pirifikasyon.

    ■ Denaturasyon modèl la pa konplè ——Ki apwopriye ogmante tanperati denaturasyon ak prolonje tan denaturasyon.

    ■ Degradasyon Modèl —— Re-prepare modèl la.

    A-2 Jadendanfan

    ■ Kalite pòv nan Jadendanfan -— Re-sentetiz Jadendanfan an.

    ■ Primè degradasyon ——Aliquot prime konsantrasyon segondè yo nan ti volim pou prezèvasyon. Evite konjelasyon miltip ak dekonjle oswa alontèm 4 ° C kriokonsèvasyon.

    ■ Konsepsyon move nan prime (egzanp longè Jadendanfan pa ase, dimè ki te fòme ant Jadendanfan, elatriye) -Reba konsepsyon (evite fòmasyon jadendanfan ak estrikti segondè)

    A-3 Mg2+konsantrasyon

    ■ Mg2+ konsantrasyon twò ba ——Byen ogmante Mg2+ konsantrasyon: Optimize Mg la2+ konsantrasyon pa yon seri de reyaksyon soti nan 1 mM a 3 mM ak yon entèval nan 0.5 mM detèmine Mg nan pi bon2+ konsantrasyon pou chak modèl ak Jadendanfan.

    A-4 tanperati rkwit

    ■ Tanperati a wo rkwit afekte obligatwa nan Jadendanfan ak modèl. ——Diminye tanperati a annealing ak optimize kondisyon an ak yon gradyan nan 2 ° C.

    A-5 ekstansyon tan

    ■ Kout tan ekstansyon —— Ogmante tan ekstansyon.

    K: Fo pozitif

    Fenomèn: echantiyon negatif montre tou bann sekans sib yo.

    A-1 Kontaminasyon nan PCR

    ■ Kwa kontaminasyon nan sekans sib oswa pwodwi anplifikasyon —— Ak anpil atansyon pa pipet echantiyon an ki gen sekans sib nan echantiyon negatif la oswa gaye yo soti nan tib la santrifujeur. Reyaktif yo oswa ekipman yo ta dwe otoklave pou elimine asid nikleyè ki deja egziste yo, epi egzistans kontaminasyon yo ta dwe detèmine nan eksperyans kontwòl negatif.

    ■ Kontaminasyon reyaktif ——Aliquot reyaktif yo epi estoke nan tanperati ki ba.

    A-2 Pwemyer

    ■ Mg2+ konsantrasyon twò ba ——Byen ogmante Mg2+ konsantrasyon: Optimize Mg la2+ konsantrasyon pa yon seri de reyaksyon soti nan 1 mM a 3 mM ak yon entèval nan 0.5 mM detèmine Mg nan pi bon2+ konsantrasyon pou chak modèl ak Jadendanfan.

    ■ Move konsepsyon Jadendanfan, ak sekans sib la gen omoloji ak sekans ki pa sib la. —— Re-konsepsyon primè.

    K: anplifikasyon ki pa espesifik

    Fenomèn: Gwoup yo anplifikasyon PCR yo konsistan avèk gwosè a espere, swa gwo oswa piti, oswa pafwa tou de bann anplifikasyon espesifik ak bann anplifikasyon ki pa espesifik rive.

    A-1 Jadendanfan

    ■ Pòv espesifik Jadendanfan

    —— Re-konsepsyon Jadendanfan.

    ■ Konsantrasyon Jadendanfan an twò wo —— Byen ogmante tanperati denaturasyon an epi prolonje tan denaturasyon an.

    A-2 Mg2+ konsantrasyon

    ■ Mg la2+ konsantrasyon twò wo ——Byen diminye konsantrasyon Mg2 +: Optimize Mg la2+ konsantrasyon pa yon seri de reyaksyon soti nan 1 mM a 3 mM ak yon entèval nan 0.5 mM detèmine Mg nan pi bon2+ konsantrasyon pou chak modèl ak Jadendanfan.

    A-3 polimeraz tèrmabl

    ■ Kantite twòp anzim ——Redwi kantite anzim kòmsadwa nan entèval 0.5 U.

    A-4 tanperati rkwit

    ■ Tanperati rkwit la twò ba ——Apropreman ogmante tanperati rkwit la oswa adopte metòd rkwit de-etap la

    A-5 sik PCR

    ■ Twòp sik PCR —— Diminye kantite sik PCR.

    K: Gwoup Mizik oswa smear

    A-1 Jadendanfan——Pòv espesifik ——Re-konsepsyon Jadendanfan a, chanje pozisyon an ak longè Jadendanfan a amelyore espesifik li yo; oswa fè PCR enbrike.

    A-2 Modèl ADN

    —— Modèl la pa pi ——Pirifye modèl la oswa ekstrè ADN avèk twous pirifikasyon.

    A-3 Mg2+ konsantrasyon

    ——Mg2+ konsantrasyon twò wo ——Byen diminye Mg2+ konsantrasyon: Optimize Mg la2+ konsantrasyon pa yon seri de reyaksyon soti nan 1 mM a 3 mM ak yon entèval nan 0.5 mM detèmine Mg nan pi bon2+ konsantrasyon pou chak modèl ak Jadendanfan.

    A-4 dNTP

    —— Konsantrasyon dNTP yo twò wo —— Diminye konsantrasyon dNTP kòmsadwa

    A-5 tanperati rkwit

    ——Tan ba tanperati rkwit ——Apropreman ogmante tanperati rkwit la

    A-6 sik

    ——Twòp sik ——Optimize nimewo sik la

    K: Konbyen ADN modèl yo ta dwe ajoute nan yon sistèm reyaksyon 50 μl PCR?
    ytry
    K: Ki jan yo anplifye fragman long?

    Premye etap la se yo chwazi polimeraz ki apwopriye a. Regilye polimeraz Taq pa ka koreksyon akòz mank de aktivite exonuclease 3'-5 ', ak dezekilib pral redwi anpil efikasite nan ekstansyon nan fragman. Se poutèt sa, regilye Taq polimeraz pa ka efektivman anplifye fragman sib ki pi gran pase 5 kb. Taq polymérase ak modifikasyon espesyal oswa lòt segondè fidelity polymérase yo ta dwe chwazi amelyore efikasite ekstansyon ak satisfè bezwen yo nan anplifikasyon fragman long. Anplis de sa, anplifikasyon nan fragman long mande tou pou ajisteman korespondan nan konsepsyon Jadendanfan, tan denaturasyon, tan ekstansyon, tanpon pH, elatriye Anjeneral, Jadendanfan ak 18-24 bp ka mennen nan pi bon sede. Yo nan lòd yo anpeche domaj modèl, tan an denaturasyon nan 94 ° C yo ta dwe redwi a 30 sec oswa mwens pou chak sik, ak tan nan monte tanperati a 94 ° C anvan anplifikasyon yo ta dwe mwens pase 1 min. Anplis, mete tanperati a ekstansyon nan apeprè 68 ° C ak desine tan an ekstansyon selon pousantaj la 1 kb / min ka asire anplifikasyon efikas nan fragman long.

    K: Ki jan amelyore fidelite a anplifikasyon nan PCR?

    Pousantaj nan erè nan anplifikasyon PCR ka redwi lè l sèvi avèk divès kalite ADN polymerases ak fidelite segondè. Pami tout polimeraz ADN Taq yo jwenn twò lwen, Pfu anzim gen to erè ki pi ba a ak fidelite ki pi wo a (gade tablo ki tache). Anplis de sa nan seleksyon anzim, chèchè yo ka plis redwi pousantaj mitasyon PCR pa optimize kondisyon reyaksyon, ki gen ladan optimize konpozisyon tanpon, konsantrasyon nan polimeraz tèrmostab ak optimize nimewo sik PCR.

    Ekri mesaj ou isit la epi voye li ban nou