Twous PCR san dirèk

Rapid anplifikasyon jèn sib la dirèkteman lè l sèvi avèk san kòm yon modèl san ekstraksyon.

Twous sa a adopte yon jenetikman Enjenieri anti-inhibitor ADN polimeraz efikasman anplifye yon sèl-kopi jèn nan genomic imen an. Sistèm nan tanpon byen optimize nan twous sa a ede polymérase a fòtman reziste anpèchman nan inhibiteurs PCR, konsa ka dirèkteman anplifye ADN lè l sèvi avèk san ak selil kiltive kòm modèl. Pwodwi sa a fasil pou opere epi li pa egzije etap konplike tankou pirifikasyon ADN oswa echantiyon tretman anvan.
Twous sa a bay kòm 2 × MasterMix, epi reyaksyon an ka fèt pa senpleman ajoute modèl san an ak primè deteksyon korespondan. Li ka aplike sou selil yo kiltive nan mamifè tankou imen, sourit, kochon, bèf ak lòt espès, osi byen ke fre oswa 4 ℃ san kriyo-konsèv, antikoagulan (EDTA, Sitrat, Eparin), likid boul nan san ak tach san sèk ki estoke sou kat komèsyal Whatman 903 ak FTA Elute.

Chat. Non	Anbalaj Size
4992529	20 µl × 100 rxn
4992530	20 µl × 500 rxn

Voye imèl ba nou

Pwodwi detay

Egzanp eksperimantal

FAQ

Pwodwi Tags

Karakteristik

■ Senp ak vit: anplifikasyon PCR ka dirèkteman fèt lè l sèvi avèk san kòm modèl, san yo pa bezwen etap sa yo fatigan nan preparasyon echantiyon ak ekstraksyon ADN.
■ Segondè pite: sote nan echantiyon pre-tretman ak etap ekstraksyon ADN ka ede pou fè pou evite kwa-kontaminasyon echantiyon yo.
■ Segondè debi: Idantifikasyon PCR pou echantiyon gwo echèl yo ka fèt lè yo konbine twous la ak plak PCR 96/384-byen.
■ Bonjan inivèsalite: Twous sa a ka avèk efikasite anplifye fragman GC segondè oswa fragman ak estrikti konplèks segondè, ak longè anplifikasyon ka jiska 5 kb.
■ Bonjan rezistans estrès: Twous sa a ka aplike pou divès espès ak echantiyon san konsève nan diferan fason.

Aplikasyon

Pwodwi PCR yo nan twous sa a gen "A" nan 3'-fen a, ki ka dirèkteman itilize pou klonaj vektè TA. Twous sa a ka itilize pou anplifikasyon fragman ADN jenomik, analiz debi jenetik ak analiz jenotip (tankou deteksyon jèn).

Tout pwodwi yo ka Customized pou ODM / OEM. Pou plis detay,tanpri klike sou Sèvis Customized (ODM / OEM)

Previous: TIANcombi DNA Lyse & Det PCR Kit

Pwochen: Twous Tisi Sourit PCR Twous

	Lè l sèvi avèk antikoagulasyon EDTA imen kòm yon modèl, 4 jèn ki gen diferan GC sa yo te anplifye pa Twous PCR san dirèk. Sistèm reyaksyon PCR la te 20 μl, epi 1 μl san te itilize kòm modèl. M: TIANGEN Makè II; 1: gwosè fragman 1090 bp, GC kontni 68.1%; 2: Fragman gwosè 1915 bp, GC kontni 70.4%; 3: Fragman gwosè 448 bp, GC kontni 74.8%; 4: Fragman gwosè 1527 bp, GC kontni 61.5%. Rezilta eksperimantal: Twous san dirèk PCR ka efektivman anplifye fragman ADN ak kontni GC nan seri 61.5% -74.8%, sijere ke li kapab anplifye fragman segondè-GC.
	Sèvi ak antikoagulasyon EDTA imen kòm modèl, 5 jèn ki gen longè diferan (ActB, Prp, DN1.0, Hn2.0 ak Hn4.0) te anplifye pa Twous PCR san dirèk. Sistèm reyaksyon PCR la te 20 μl, epi 1 μl san te itilize kòm modèl. M: TIANGEN Makè II; 1-3: 3 echantiyon san diferan; NTC: kontwòl san prime. Rezilta eksperimantal: Twous san dirèk PCR ka anplifye fragman ak longè osi lontan ke 4 kb, sijere ke li kapab anplifye fragman long.
	Lè l sèvi avèk antikoagulasyon EDTA imen kòm modèl, Twous PCR san dirèk te itilize pou deteksyon PCR nan echantiyon san diferan. Sistèm reyaksyon PCR la te 20 μl, epi 1 μl san te itilize kòm modèl. M: TIANGEN Makè II; 1-9: kantite lajan an chaje nan san se 0.1 μl, 0.2 μl, 0.3 μl, 0.4 μl, 1 μl, 2 μl, 3 μl, 4 μl ak 5 μl, respektivman; NTC: kontwòl ki pa gen okenn modèl Rezilta eksperimantal: Twous PCR san dirèk gen gwo rezistans nan san epi li ka anplifye echantiyon san ak ranje loading 0.1-5 μl.
	Echantiyon san nan imen, rat, poul ak lòt espès ak tretman diferan yo te itilize kòm modèl. Twous PCR san dirèk te itilize pou anplifye PRNP (imen, 750 bp), Actin (rat, 200 bp), ak β-Actin (poul, 1.0 kb). Sistèm reyaksyon PCR la te 20 μl, epi 1 μl san te itilize kòm modèl. M: TIANGEN Makè II. Rezilta eksperimantal: Twous PCR san dirèk ka aplike sou yon pakèt echantiyon, epi deteksyon PCR dirèk la ka fèt sou echantiyon san ki soti nan divès espès ak tretman diferan.

K: Pa gen bann anplifikasyon

A-1 Modèl

■ Modèl la gen enpurte pwoteyin oswa inhibiteur Taq, elatriye ——Pire modèl ADN, retire enpurte pwoteyin oswa ekstrè ADN modèl avèk twous pirifikasyon.

■ Denaturasyon modèl la pa konplè ——Ki apwopriye ogmante tanperati denaturasyon ak prolonje tan denaturasyon.

■ Degradasyon Modèl —— Re-prepare modèl la.

A-2 Jadendanfan

■ Kalite pòv nan Jadendanfan -— Re-sentetiz Jadendanfan an.

■ Primè degradasyon ——Aliquot prime konsantrasyon segondè yo nan ti volim pou prezèvasyon. Evite konjelasyon miltip ak dekonjle oswa alontèm 4 ° C kriokonsèvasyon.

■ Konsepsyon move nan prime (egzanp longè Jadendanfan pa ase, dimè ki te fòme ant Jadendanfan, elatriye) -Reba konsepsyon (evite fòmasyon jadendanfan ak estrikti segondè)

A-3 Mg²⁺konsantrasyon

■ Mg²⁺ konsantrasyon twò ba ——Byen ogmante Mg²⁺konsantrasyon: Optimize Mg la²⁺ konsantrasyon pa yon seri de reyaksyon soti nan 1 mM a 3 mM ak yon entèval nan 0.5 mM detèmine Mg nan pi bon²⁺ konsantrasyon pou chak modèl ak Jadendanfan.

A-4 tanperati rkwit

■ Tanperati a wo rkwit afekte obligatwa nan Jadendanfan ak modèl. ——Diminye tanperati a annealing ak optimize kondisyon an ak yon gradyan nan 2 ° C.

A-5 ekstansyon tan

■ Kout tan ekstansyon —— Ogmante tan ekstansyon.

K: Fo pozitif

Fenomèn: echantiyon negatif montre tou bann sekans sib yo.

A-1 Kontaminasyon nan PCR

■ Kwa kontaminasyon nan sekans sib oswa pwodwi anplifikasyon —— Ak anpil atansyon pa pipet echantiyon an ki gen sekans sib nan echantiyon negatif la oswa gaye yo soti nan tib la santrifujeur. Reyaktif yo oswa ekipman yo ta dwe otoklave pou elimine asid nikleyè ki deja egziste yo, epi egzistans kontaminasyon yo ta dwe detèmine nan eksperyans kontwòl negatif.

■ Kontaminasyon reyaktif ——Aliquot reyaktif yo epi estoke nan tanperati ki ba.

A-2 Pwemyer

■ Mg²⁺ konsantrasyon twò ba ——Byen ogmante Mg²⁺ konsantrasyon: Optimize Mg la²⁺ konsantrasyon pa yon seri de reyaksyon soti nan 1 mM a 3 mM ak yon entèval nan 0.5 mM detèmine Mg nan pi bon²⁺ konsantrasyon pou chak modèl ak Jadendanfan.

■ Move konsepsyon Jadendanfan, ak sekans sib la gen omoloji ak sekans ki pa sib la. —— Re-konsepsyon primè.

K: anplifikasyon ki pa espesifik

Fenomèn: Gwoup yo anplifikasyon PCR yo konsistan avèk gwosè a espere, swa gwo oswa piti, oswa pafwa tou de bann anplifikasyon espesifik ak bann anplifikasyon ki pa espesifik rive.

A-1 Jadendanfan

■ Pòv espesifik Jadendanfan

—— Re-konsepsyon Jadendanfan.

■ Konsantrasyon Jadendanfan an twò wo —— Byen ogmante tanperati denaturasyon an epi prolonje tan denaturasyon an.

A-2 Mg²⁺ konsantrasyon

■ Mg la²⁺ konsantrasyon twò wo ——Byen diminye konsantrasyon Mg2 +: Optimize Mg la²⁺ konsantrasyon pa yon seri de reyaksyon soti nan 1 mM a 3 mM ak yon entèval nan 0.5 mM detèmine Mg nan pi bon²⁺ konsantrasyon pou chak modèl ak Jadendanfan.

A-3 polimeraz tèrmabl

■ Kantite twòp anzim ——Redwi kantite anzim kòmsadwa nan entèval 0.5 U.

A-4 tanperati rkwit

■ Tanperati rkwit la twò ba ——Apropreman ogmante tanperati rkwit la oswa adopte metòd rkwit de-etap la

A-5 sik PCR

■ Twòp sik PCR —— Diminye kantite sik PCR.

K: Gwoup Mizik oswa smear

A-1 Jadendanfan——Pòv espesifik ——Re-konsepsyon Jadendanfan a, chanje pozisyon an ak longè Jadendanfan a amelyore espesifik li yo; oswa fè PCR enbrike.

A-2 Modèl ADN

—— Modèl la pa pi ——Pirifye modèl la oswa ekstrè ADN avèk twous pirifikasyon.

A-3 Mg²⁺ konsantrasyon

——Mg²⁺ konsantrasyon twò wo ——Byen diminye Mg²⁺ konsantrasyon: Optimize Mg la²⁺ konsantrasyon pa yon seri de reyaksyon soti nan 1 mM a 3 mM ak yon entèval nan 0.5 mM detèmine Mg nan pi bon²⁺ konsantrasyon pou chak modèl ak Jadendanfan.

A-4 dNTP

—— Konsantrasyon dNTP yo twò wo —— Diminye konsantrasyon dNTP kòmsadwa

A-5 tanperati rkwit

——Tan ba tanperati rkwit ——Apropreman ogmante tanperati rkwit la

A-6 sik

——Twòp sik ——Optimize nimewo sik la

K: Konbyen ADN modèl yo ta dwe ajoute nan yon sistèm reyaksyon 50 μl PCR?

K: Ki jan yo anplifye fragman long?

Premye etap la se yo chwazi polimeraz ki apwopriye a. Regilye polimeraz Taq pa ka koreksyon akòz mank de aktivite exonuclease 3'-5 ', ak dezekilib pral redwi anpil efikasite nan ekstansyon nan fragman. Se poutèt sa, regilye Taq polimeraz pa ka efektivman anplifye fragman sib ki pi gran pase 5 kb. Taq polymérase ak modifikasyon espesyal oswa lòt segondè fidelity polymérase yo ta dwe chwazi amelyore efikasite ekstansyon ak satisfè bezwen yo nan anplifikasyon fragman long. Anplis de sa, anplifikasyon nan fragman long mande tou pou ajisteman korespondan nan konsepsyon Jadendanfan, tan denaturasyon, tan ekstansyon, tanpon pH, elatriye Anjeneral, Jadendanfan ak 18-24 bp ka mennen nan pi bon sede. Yo nan lòd yo anpeche domaj modèl, tan an denaturasyon nan 94 ° C yo ta dwe redwi a 30 sec oswa mwens pou chak sik, ak tan nan monte tanperati a 94 ° C anvan anplifikasyon yo ta dwe mwens pase 1 min. Anplis, mete tanperati a ekstansyon nan apeprè 68 ° C ak desine tan an ekstansyon selon pousantaj la 1 kb / min ka asire anplifikasyon efikas nan fragman long.

K: Ki jan amelyore fidelite a anplifikasyon nan PCR?

Pousantaj nan erè nan anplifikasyon PCR ka redwi lè l sèvi avèk divès kalite ADN polymerases ak fidelite segondè. Pami tout polimeraz ADN Taq yo jwenn twò lwen, Pfu anzim gen to erè ki pi ba a ak fidelite ki pi wo a (gade tablo ki tache). Anplis de sa nan seleksyon anzim, chèchè yo ka plis redwi pousantaj mitasyon PCR pa optimize kondisyon reyaksyon, ki gen ladan optimize konpozisyon tanpon, konsantrasyon nan polimeraz tèrmostab ak optimize nimewo sik PCR.

Ekri mesaj ou isit la epi voye li ban nou